《哺乳动物细胞重组蛋白工程》围绕建立哺乳动物细胞高效表达体系所需的关键技术，从哺乳动物细胞、基因工程、载体工程、细胞工程、培养基优化、培养工艺和重组蛋白的分离及纯化、分析鉴定、重组蛋白糖基化修饰与控制、重组抗体高效表达与质量控制以及重组蛋白技术产品的研究开发与管理等方面详细介绍了哺乳动物细胞重组蛋白工程相关的理论和技术。
本书内容反映了近十年来哺乳动物细胞重组蛋白工程领域的进展，可作为生物制药相关专业本科生、研究生及从事生物制药的广大科研工作人员的参考用书。

第一章　适合重组蛋白表达的哺乳动物细胞 1
　　第一节　CHO细胞表达系统 3
　　　　一、CHO细胞历史与分类 3
　　　　二、CHO细胞表达系统的优点 10
　　　　三、CHO细胞培养 13
　　第二节　HEK293细胞表达系统 17
　　　　一、HEK293细胞的分类与优点 17
　　　　二、HEK293细胞培养与鉴定 19
　　第三节　其他哺乳动物细胞 21
　　　　一、人源化细胞系 21
　　　　二、非人源化细胞系 23
　　参考文献 24

第二章　基因工程 28
　　第一节　基因工程简介 28
　　　　一、基因工程概念 28
　　　　二、基因工程的发展史 29
　　　　三、基因工程的应用和基因工程医药的前景 32
　　第二节　哺乳动物细胞基因工程 35
　　　　一、目的基因获取 36
　　　　二、载体系统 37
　　　　三、DNA的体外重组 45
　　　　四、重组DNA的转化 49
　　　　五、重组DNA的筛选与鉴定 49
　　　　六、目的基因的表达 50
　　参考文献 52

第三章　载体工程 55
　　第一节　表达载体元件的优化 56
　　　　一、启动子 56
　　　　二、增强子 66
　　　　三、多聚腺苷酸尾 67
　　　　四、内含子 67
　　　　五、内部核糖体进入位点和F2A 68
　　　　六、选择标记 69
　　　　七、翻译与分泌优化 69
　　第二节　染色质调控元件 71
　　　　一、核基质附着区 72
　　　　二、遍在染色质开放元件 75
　　　　三、绝缘子 75
　　　　四、稳定抗阻遏元件 76
　　第三节　靶基因整合 77
　　　　一、位点特异性重组系统 77
　　　　二、基于核酸酶和DNA修复途径的位点特异性整合 79
　　第四节　非靶向转基因整合 80
　　　　一、转座子 80
　　　　二、慢病毒载体 80
　　参考文献 81

第四章　转染与筛选 87
　　第一节　细胞转染 87
　　　　一、细胞转染的原理 87
　　　　二、细胞转染方法 88
　　第二节　细胞转染后的筛选 93
　　　　一、瞬时转染与稳定转染 93
　　　　二、稳定细胞系的筛选 94
　　　　三、CHO细胞加压筛选 99
　　　　四、HEK293细胞表达系统 102
　　参考文献 106

第五章　基因组编辑与细胞工程 108
　　第一节　基因组编辑技术 109
　　　　一、概念 109
　　　　二、常用的基因组编辑技术 109
　　第二节　CRISPR/Cas9技术在哺乳动物细胞中的应用 117
　　　　一、基因的破坏 119
　　　　二、位点特异性基因整合 120
　　　　三、基因激活或抑制 120
　　　　四、基因组水平目的基因敲除的筛选 121
　　　　五、基因编辑应用实验设计 121
　　　　六、脱靶分析 124
　　第三节　CHO细胞工程 125
　　　　一、目的基因 126
　　　　二、细胞工程常用技术 131
　　　　三、抗凋亡工程 134
　　　　四、代谢工程调控 135
　　　　五、细胞骨架与细胞周期工程 136
　　　　六、蛋白质翻译后修饰工程 136
　　　　七、蛋白质合成工程 138
　　参考文献 139

第六章　动物细胞培养基及其优化 144
　　第一节　细胞培养基 145
　　　　一、细胞培养基简介 145
　　　　二、动物细胞培养基的分类 146
　　　　三、细胞培养基的相关政策与标准 151
　　　　四、细胞培养基的主要成分 162
　　　　五、细胞培养基的理化性质 170
　　　　六、细胞培养基的灭菌及储存 171
　　　　七、细胞培养基的配制 173
　　第二节　CHO细胞培养基 177
　　　　一、CHO细胞培养基概况 177
　　　　二、CHO细胞无血清培养基的成分组成及优化 179
　　第三节　其他细胞系培养基 182
　　　　一、HEK293细胞系培养基 182
　　　　二、HeLa细胞系培养基 183
　　参考文献 184

第七章　培养工艺与大规模培养 188
　　第一节　动物细胞大规模培养参数 189
　　　　一、温度 189
　　　　二、通气 189
　　　　三、pH 190
　　　　四、渗透压 190
　　　　五、搅拌 190
　　　　六、防止污染 190
　　第二节　动物细胞大规模培养 191
　　　　一、动物细胞大规模培养反应器 191
　　　　二、动物细胞大规模培养操作方式 194
　　参考文献 231

第八章　哺乳动物细胞重组蛋白的分离

基因工程技术诞生早期，重组蛋白生产主要以原核细胞为主，后期逐渐发展起来酵母、昆虫等表达系统，但这些表达系统都由于缺乏人类细胞的翻译后修饰，不适合表达结构复杂的大分子蛋白。因此，哺乳动物细胞表达系统是目前重组蛋白药物生产的重要平台，并且越来越成为重组蛋白的主要表达系统。
近三十年特别是近十年来，科研工作者围绕哺乳动物细胞表达系统重组蛋白表达做了大量卓有成效的工作，克服了哺乳动物细胞重组蛋白表达量低、表达不稳定等问题，重组蛋白的产量和质量都有了大幅度提高，重组抗体表达量已经达到克级水平。
为了适应国内哺乳动物细胞表达重组蛋白的迅猛发展及其教学、科研的需要，在长期的科研中，我们不断积累总结经验并归纳提炼，在阅读大量国内外文献的基础上，编著了这本《哺乳动物细胞重组蛋白工程》。全书共分十二章，主要内容包括哺乳动物细胞、基因工程、载体工程、细胞工程、培养基优化、培养工艺、分离与纯化、分析鉴定及重组蛋白技术产品的研究开发与管理、重组蛋白糖基化修饰与控制及重组抗体高效表达与质量控制等内容。
为了方便读者阅读，本书尽可能减少专业术语，力求做到通俗易懂；为了保证理论和技术的前沿性，第一次出现的专业术语都进行了英文注释，并且书后附有中英文词汇表；为便于读者了解国内外近期的发展动态，每章附有引自国内外不同学者近期的重要文献。
本书可作为生物制药相关专业本科生、研究生及从事生物制药的广大科研工作人员的参考用书。参加本书撰写的人员来自河南省重组药物蛋白表达系统国际合作实验室、新乡医学院从事重组蛋白表达科研一线的科研人员，他们具有多年的哺乳动物细胞重组蛋白表达的科研工作经验，为本书编写投入了大量的精力。另外，化学工业出版社在编辑加工中做了大量细致的工作，在此对他们表示衷心感谢！
写作是一项十分复杂而繁重的工作，尽管每位著者都为本书付出了辛勤劳动，但是由于著者水平有限，书中难免有疏漏和不足，敬请读者提出宝贵意见，以便再版时改正。

2020年3月于新乡医学院 王天云